હેતુપૂર્વક ઉપયોગ: ચેપીબોવાઇન રાઇનોટ્રેચેટીસ વાયરસએન્ટિબોડી ELISA ડિટેક્શન કિટનો ઉપયોગ થાય છેચેપી rhinotracheitis નક્કી કરોવિટ્રોમાં બોવાઇન સીરમમાં વાયરસ એન્ટિબોડીઝ.
નમૂનો: સીરમ
પૂરી પાડવામાં આવેલ સામગ્રી:
પરીક્ષણ પ્રક્રિયાઓ અને અર્થઘટન
પગલું 1 પરીક્ષણ પ્રક્રિયા
1.1 સોલ્યુશનની તૈયારી ધોવા
Working એકાગ્રતા wએશિંગ પ્રવાહી:ઉપયોગ કરતા પહેલા, વોશ સોલ્યુશનને ઓરડાના તાપમાને (20-25 ડિગ્રી) પુનઃસ્થાપિત કરવું જોઈએ અને તેને સમાન બનાવવા માટે સમાનરૂપે હલાવો. પછી શુદ્ધ પાણીથી 20 ગણા ઘટ્ટ ધોવાનું દ્રાવણ પાતળું કરો (ઉદાહરણ તરીકે, 95ml શુદ્ધ પાણીમાં 5ml કેન્દ્રિત ધોવાનું દ્રાવણ ઉમેરવામાં આવે છે), સારી રીતે ભળી દો, અને પાતળું ધોવાનું પ્રવાહી 2-8 ડિગ્રી પર 7 દિવસ માટે સંગ્રહિત કરી શકાય છે.
1.2 નમૂનાની તૈયારી
① આખા પ્રાણીનું લોહી લેવામાં આવ્યું હતું, 10 મિનિટ માટે 4000rpm પર સેન્ટ્રીફ્યુઝ કરવામાં આવ્યું હતું અને સુપરનેટન્ટ એકત્રિત કરવામાં આવ્યું હતું. હેમોલિસિસ વિના પણ સીરમ કુદરતી રીતે કોગ્યુલેટ થઈ શકે છે.
② સીરમ ડિલ્યુશન પ્લેટમાં 50 વખત ટેસ્ટ કરવા માટે સીરમને પાતળું કરો (ઉદાહરણ તરીકે: 147ul સેમ્પલ ડિલ્યુએન્ટમાં ચકાસવા માટે 3ul સીરમ ઉમેરો).
નોંધ: નકારાત્મક અને સકારાત્મક નિયંત્રણોને હળવા કરવાની જરૂર નથી
1.3 ટેસ્ટ પ્રક્રિયા
① એન્ઝાઇમ લેબલ માઇક્રોપ્લેટ લો (નમૂનાઓની સંખ્યા અનુસાર, ડિસએસેમ્બલ કરી શકાય છે અને ઘણી વખત ઉપયોગ કરી શકાય છે), એન્ઝાઇમ લેબલ માઇક્રોપ્લેટમાં 100ul પાતળું સીરમ ઉમેરો, નકારાત્મક નિયંત્રણ અને હકારાત્મક નિયંત્રણ માટે દરેક બે કૂવા સેટ કરો અને અનુક્રમે પ્રતિક્રિયામાં 100ul ઉમેરો. પ્લેટને ઢાંકવા માટે સીલિંગ પ્લેટ ફિલ્મનો ઉપયોગ કરીને કૂવામાં નમૂનાને હળવા હાથે હલાવો અને 30 મિનિટ માટે 37 ડિગ્રી પર પકાવો.
②સીલિંગ પ્લેટ ફિલ્મ ખોલો, પ્લેટમાંના સોલ્યુશનને સારી રીતે હલાવો, દરેક કૂવામાં 300µl વર્કિંગ કોન્સન્ટ્રેશન વૉશિંગ લિક્વિડ ઉમેરો અને પછી કૂવામાં પ્રવાહીને કાઢી નાખો. ઉપરોક્ત પગલાંને 5 વખત પુનરાવર્તિત કરો, અને અંતે સ્વચ્છ શોષક કાગળ પર સૂકવી દો.
③ ડિલ્યુટેડ એન્ઝાઇમ કન્જુગેટ: એન્ઝાઇમ કન્જુગેટ (80×) ને 80 વખત પાતળું કરો (ઉદાહરણ તરીકે: 10ul એન્ઝાઇમ કન્જુગેટ કોન્સેન્ટ્રેટ + 790ul સેમ્પલ મંદ, જરૂરી ચોક્કસ રકમ પરીક્ષણ નમૂનાઓની સંખ્યા અનુસાર ગણવામાં આવે છે), સારી રીતે મિક્સ કરો અને બાજુ પર રાખો.
④દરેક કૂવામાં 100µl એન્ઝાઇમ કન્જુગેટ ઉમેરો, પ્લેટને ઢાંકી દો અને 30 મિનિટ માટે 37 ડિગ્રી પર પકાવો.
⑤ એન્ઝાઇમ પ્લેટ ધોવા, ચોક્કસ કામગીરી ઉપરોક્ત ② જેવી જ છે.
⑥દરેક કૂવામાં 100µl સબસ્ટ્રેટ સોલ્યુશન ઉમેરો, પ્લેટને ઢાંકીને 10 મિનિટ માટે પ્રકાશથી 37 ડિગ્રી દૂર રાખો.
પગલું 2 પરિણામનું અર્થઘટન
દરેક કૂવાનું OD450 મૂલ્ય 96-વેલ માઇક્રોપ્લેટ રીડર પર વાંચવામાં આવ્યું હતું.
2.1 માન્યતા નકારાત્મક નિયંત્રણનું સરેરાશ OD450nm મૂલ્ય < 0.25 હતું અને હકારાત્મક નિયંત્રણનું સરેરાશ OD450nm મૂલ્ય 0.6 કરતાં વધારે અથવા બરાબર હતું, પ્રાયોગિક પરિણામો માન્ય હતા. નહિંતર, પરીક્ષણ પુનરાવર્તિત થવું જોઈએ.
2.2 ગણતરી પદ્ધતિ
દરેક નમૂના માટે, સુધારેલ નમૂના અને નિયંત્રણ મૂલ્યોનો ઉપયોગ કરીને નીચે પ્રમાણે S/P ની ગણતરી કરો:
2.3 પરિણામ અર્થઘટન
જ્યારે S/P < 0.2, ત્યારે તેને નકારાત્મક ગણવામાં આવે છે.
જ્યારે S/P > 0.3, ત્યારે તેને હકારાત્મક ગણવામાં આવે છે.
જ્યારે 0.2 S/P કરતા ઓછું અથવા 0.3 કરતા ઓછું અથવા બરાબર હોય, ત્યારે તેને શંકાસ્પદ ગણવામાં આવે છે અને એક અઠવાડિયા પછી નમૂના લેવા અને પરીક્ષણનું પુનરાવર્તન કરવાનું સૂચન કરે છે.
